第４３卷第７期 ２０１ ３年７月 温州医学院学报 ＶＯｌ＿４３ Ｎｏ．７ Ｊｕ１．２０１３ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｗｅｎｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ 翻 不同剂量三七皂苷单体Ｒｇ ｌ下调大鼠低Ｏ２高ＣＯ 性 肺动脉平滑肌细胞ＥＲＫＩ／２的表达 陈丹 ，郝卯林 ，何金波 ，黄林静 ，马迎春 陈海娥 ，唐兰兰。，王万铁 ，（１．温州医科大学科，浙江杭州病理生理学教研室，浙江３１０００５） 温州 ３２５０３５；２．浙江中医药大学附属第二医院病理 ［摘要］目的：观察在低Ｏ，高ＣＯ。条件下，不同剂量的三七皂苷单体Ｒｇｌ对肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣｓ） 细胞外信号调节激酶（ＥＲＫ１／２）表达的影响。方法：分离并纯化ｓＤ大鼠ＰＡＳＭＣｓ，随机分６组：常氧对照 组（Ｎ组）、低Ｏ 高ｃ０ 组（Ｈ组）、ＤＭＳＯ对照组（ＨＤ组）、Ｒｇｌ低、中、高剂量干预组（ＲｇＬ组、ＲｇＭ组、ＲｇＨ 组）。分别以Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ和ＲＴ．ＰＣＲ法检测磷酸化ＥＲＫ（Ｐ—ＥＲＫ）蛋白和ＥＲＫ１及ＥＲＫ２ ｍＲＮＡ的表达水平。结 果：与Ｎ组相比，ＨＤ组ｐ－ＥＲＫ蛋白和ＥＲＫ１、ＥＲＫ２ ｍＲＮＡ表达水平明显高于Ｎ组（尸＜０．０１）；ＲｇＬ、ＲｇＭ、ＲｇＨ 组在不同程度上抑制了Ｐ—ＥＲＫ蛋白和ＥＲＫ１、ＥＲＫ２ ｍＲＮＡ的表达（Ｐ＜０．Ｏ１），其中三七皂苷单体Ｒｇｌ以４ｏ ｍｇ／Ｌ的浓度为佳。结论：三七皂苷单体Ｒｇｌ可下调低０。高ｃ０。条件下大鼠ＰＡＳＭＣｓ ＥＲＫ１／２的表达，这可能 是Ｒｇｌ减轻低０。高ｃ０。性肺动脉收缩（ＨＨＰＶ）的机制之一。 ［关键词］ 肺动脉平滑肌细胞；低０。高ＣＯ，；ＥＲＫ１／２通路；三七皂苷单体Ｒｇｌ；大鼠 ［中图分类号］ Ｒ３６３ ［文献标志码］ Ａ ［文章编号］ １０００－２１３８（２０１３）０７—０４４４—０４ ＥＲＫＩ／２ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｉａｌ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ ｄＯｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｂｙ ｎＯｔｏｇｉｎｓｅｎＯｓｉｄｅ Ｒｇｌ ｗｉｔｈ ｖａｒｉｏｕｓ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｄｕｒｉｎｇ ｈｙｐｏｘｉａ ｈｙｐｅｒｃａｐｎｉａ ｉｎ ｒａｔｓ ＣＨＥＮ Ｄａｎ ，ＨＡＯ Ｍａｏｌｉｎ ，ＨＥ Ｊｉｎｂｏ ， ＨＵＡＮＧ Ｌｉｎｊｉｎｇｌ，ＭＡ￣ｎｇｃｈｕｎ１．ＣＨＥＮ Ｈａｉｅ１．ＴＡＮＧ Ｌａｎｌａｎ２ ＷＡＮＧ Ｗａｎｔｉｅ ． １．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，Ｗｅｎｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｅｎｚｈｏｕ，３２５０３５；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＰａｔｈｏｌｏｇｙ，ｔｈｅ Ｓｅｃｏｎｄ Ａｆｉｌｆｉ— ａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＺｈ￣ｉａｎｇ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ，３１０００５ ０ｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ Ｒｇｌ ｗｉｔｈ ｖａｒｉｏｕｓ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｉｇｎａｌ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ（ＥＲＫ１／２）ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｉａｌ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ（ＰＡＳＭＣｓ） ｕｎｄｅｒ ｈｙｐｏｘｉａ ａｎｄ ｈｙｐｅｒｃａｐｎｉａ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＰＡＳＭＣｓ ｗｅｒｅ ｐｒｉｍａｒｉｌｙ ｃｕｌｔｕｒｅｄ，ａｎｄ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｓｉｘ ｇｒｏｕｐｓ：ＳＤ ｒａｔ ｕｎｄｅｒ ｎｏｒｍｏｘｉｃ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ａｓ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（Ｎ ｇｒｏｕｐ），ｈｙｐｏｘｉａ ｈｙｐｅｒｃａｐｎｉａ ｇｒｏｕｐ（Ｈ ｇｒｏｕｐ），ＤＭＳＯ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（ＨＤ ｇｒｏｕｐ），Ｒｇｌ—ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐｓ（ＲｇＬ，ＲｇＭ ａｎｄ ＲｇＨ ｇｒｏｕｐ）．Ｗｅｓｔｅｒｎ—ｂｌｏｔ ａｎｄ ＲＴ－ＰＣＲ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｐ．ＥＲＫ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＥＲＫ１ ａｎｄ ＥＲＫ２ ｍＲＮＡ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｒｅｓｕｌｓ：Ｗｅｓｔｅｍ—ｂｌｏｔ ｔａｎｄ ＲＴ－ＰＣＲ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｐ—ＥＲＫ ｐｒｏｔｅｉｎ．ＥＲＫ １ ａｎｄ ＥＲＫ２ ｍＲＮＡ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｉｎ ＨＤ ｇｒｏｕｐ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ Ｎ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０１）．Ｗｈｅｒｅａｓ，ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＥＲＫ１／２ ｍＲＮＡ ｗａｓ ｍａｒｋｅｄｌｙ ｌｏｗｅｒ ｉｎ Ｒｇｌ—ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐｓ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ＨＤ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０１），ａｎｄ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｇｌ ｉｓ ４０ ｍｇ／Ｌ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ Ｒｇｌ ｃａｎ ａｔｔｅｎｕａｔｅ ＨＨＰＶ，ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＥＲＫＩ／２． 口墨墨圜ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｉａｌ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ；ｈｙｐｏｘｉａ ｈｙｐｅｒｃａｐｎｉａ；ＥＲＫ１／２ ｓｉｇｎａｌ ｐａｔｈｗａｙ； ｎＯｔＯｇｉｎｓｅｎＯｓｉｄｅ Ｒｇ ｌ；ｒａｔｓ 机体持续处于低氧环境时 肺小动脉会发生收 缩反应，即低氧性肺动脉收缩 （ｈｙｐｏｘｉａ．ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｖａｓｏｃｏｎｓｔｒｉｃｔｉｏｎ，ＨＰＶ）。机体通过ＨＰＶ 来维持肺泡一毛细血管通气／血流（Ｖ／Ｑ）比值正常， 为一种代偿适应手段。持续的ＨＰＶ常伴有ｃＯ。蓄积， 会引起肺动脉平滑肌细胞（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ａｆｔｅｒｉａｌ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ，ＰＡＳＭＣｓ）发生增殖，细胞 收稿日期：２０１２－１１—３０ 基金项目：浙江省中医药科技计划重点资助项目（２０ｏ８ＺＡＯ １ ７）； 浙江省中医药重点学科建设计划项目（２ ０ １ ２一Ｘ Ｋ—Ａ ２ ８）。 作者简介：陈丹（１ ９ ８ ６一），女，贵州毕节人，硕士生。 通信作者：王万铁，教授，主任医师，Ｅｍａｉｌ：ｗｗｔ＠ｗｚｍｃ．ｅｄｕ．ｃｎ。 －－－——外基质分泌增加，进而使血管壁增厚，最终导致肺 血管重塑，被认为是肺动脉高压（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ａＦ． ４４４－－－—— 第４３卷 陈丹，等：不同剂量三七皂苷单体Ｒｇｌ下调大鼠低０。高ＣＯ。性肺动脉平滑肌细胞ＥＲＫ１／２的表达 第７期 ｔｅｒｉａｌ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，ＰＡＨ）发生的始动因素［ ］。因 此，研究低０。高ｃ０ 性肺动脉高压（ｈｙｐｏｘｉａ ｈｙｐｅｒ． ｃａｐｎｉａ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｉａｌ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ， ０ ；低０ 高ＣＯ。组（Ｈ组）：６％Ｃ０２＋１％０。；ＤＭＳＯ对照 组（ＨＤ组）：０．０５％ＤＭＳＯ＋６％ＣＯ。十１％０。；Ｒｇｌ干预 组分别为Ｒｇｌ（１０、４０、１００ ｍｇ／Ｌ）＋６％ＣＯ。＋１％０。。 ＨＨＰＨ）的发生机制具有临床指导意义。细胞外信号 调节激酶（ｅｘｔｒａｃｅｌ１ｕｌａｒ ｓｉｇｎａｌ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ， ＥＲＫ１／２）通路是调节细胞生长、增殖的重要信号转 导通路之一［ ，参与了多种因素引起的ＰＡＳＭＣｓ迁移 与增殖ｌ３＿ ，可能与肺血管重塑有关。 三七总皂苷（ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ ｓａｐｏｎｉｎ， １．２．３ ｐ－ＥＲＫ蛋白含量检测：收集分离纯化后的细 胞，冰浴提取蛋白，蛋白定量参照ＢＣＡ法试剂盒说 明。配制好１０％ＳＤＳ．ＰＡＧＥ凝胶后，电泳分离蛋白， 湿转法转至ＰＶＤＦ膜，５％脱脂牛奶室温下封闭２ ｈ； 一抗孵育（单克隆抗体浓度为１：２ ０００），４。Ｃ过夜； ＴＢＳＴ洗膜后二抗孵育（浓度为１：４ ０００），室温下反 应２ ｈ；再次洗膜，ＥＣＬ发光试剂显色，暗室里ｘ胶 片感光，继之显影并定影，以ＥＲＫ蛋白为内参。 ＰＮＳ）具有钙拮抗及降压的药效作用，为中药三七的 主要有效成分，其主要单体成分为Ｒｇ １。前期研究 证实：ＰＮＳ具有减轻大鼠低０。高ｃｏ。性肺动脉收缩 （ｈｙｐｏｘｉａ ｈｙｐｅｒｃａｐｎｉａ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｖａｓｏｃｏｎ— １．２．４ ＥＲＫ１、ＥＲＫ２基因表达水平检测：收集细胞 后，冰上提取ＲＮＡ，并测定ＲＮＡ浓度，逆转录合成 ｃＤＮＡ，进行ＰＣＲ扩增反应。引物序列见表１。 表１ 引物序列 扩增片段 引物序列 上游序列５’－ＧＣＴ ＧＡＡ ＴＣＡ ＣＡＴ ＣＣＴ ＧＧＧ ＴＡＴ一３ 下游序列５’一ＡＧＡ ＴＣＴ ＧＴＡ ＴＣＣ ＴＧＧ ＣＴＧ ＧＡＡ－３ 上游序列５’－ＧＣＡ ＧＧＴ ＧＴＴ ＣＧＡ ＣＧＴ ＧＧＧ ＡＡＴ－３ ｓｔｒｉｃｔｉｏｎ，ＨＨＰＶ）的作用 ］。但是，Ｒｇｌ干预ＨＨＰＶ 及ＰＡＨ形成的机制迄今尚不清楚。本课题组采用不 同剂量的Ｒｇｌ干预低０。高ｃ０。条件下的ＰＡＳＭＣｓ，通 过观察ＥＲＫ１／２蛋白磷酸化水平以及ＥＲＫ１／２ ｍＲＮＡ表 达水平，探讨Ｒｇｌ在其中的作用机制，为Ｒｇｌ治疗 ＨＨＰＶ及ＰＡＨ奠定实验基础。 １材料和方法 １．１材料 下游序列５’－ＧＴＧ ＣＡＧ ＡＡＣ ＡＴＴ ＡＧＧ ＴＧＡ ＡＴＡ一３ ３ －ａｃｔｉｎ（４００ ｂｐ） 上游序列５’－ＧＡＧ ＡＣＣ ＴＴＣ ＡＡＣ ＡＣＣ ＣＣＡ ＧＣＣ一下游序列５’－ＴＣＧ ＧＧＧ ＧＡＴ ＣＧＧ ＡＡＣ ＣＧＣ ＴＣＡ－３ １．１．１实验动物：ＳＰＦ级ｓＤ雄性大鼠１０只，体质 量为（２１０±１０）ｇ，购于温州医科大学实验动物中 心，动物许可证号为８ＣＸＫ（浙）２００８－０１５６号。 １．１．２ 药物与试剂：三七皂苷单体Ｒｇ１（纯度＞ ９８％，购于吉林大学基础医学院有机化学教研室）， ４。Ｃ保存于二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）中。胎牛血清及ＤＭＥＭ 高糖培养基（Ｇｉｂｃｏ公司，ｕｓ）；ＢＣＡ蛋白定量试剂 盒（Ｐｉｅｒｃｅ公司，ＵＳ）；ＳＡＢＣ—ＦＩＴＣ（ＰＯＤ）双标试剂 盒及ＤＡＢ试剂盒（浓缩型）（宝生物工程有限公司， 大连）；ＳＭ一 一ａｃｔｉｎ单克隆抗体（宝生物工程有限 公司，大连）；磷酸化ＥＲＫ（ｐ－ＥＲＫ）、ＥＲＫ单克隆抗 体及ＨＲＰ标记的二抗（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ公 司，ＵＳ）；ＥＣＬ试剂盒（Ｐｉｅｒｃｅ公司，ｕｓ）；ＲＴ—ＰＣＲ ＥＲＫ１反应条件为预变性９４。Ｃ，２ ｍｉｎ，变性 ９８。Ｃ，１０ Ｓ，退火５４。Ｃ，１５ Ｓ，延伸７２。Ｃ，１ ｍｉｎ，最后再延伸７２。Ｃ，１０ ｍｉｎ。ＥＲＫ２反应条件 为预变性９４ ＤＣ，２ ｍｉｎ，变性９８。Ｃ，１０ Ｓ，退火 ５６。Ｃ，Ｉ５ Ｓ，延伸７２。Ｃ，３０ Ｓ，最后再延伸７２ 。Ｃ，１０ ｍｉｎ。ｐ—ａｃｔｉｎ反应条件为预变性９４。Ｃ， ２ ｍｉｎ，变性９８。Ｃ，１０ Ｓ，退火５３ ｏＣ，１５ Ｓ，延 伸７２。Ｃ，３０ ｓ，最后再延伸７２。ｃ，．１０ ｍｉｎ。 ｉ．３统计学处理方法、采用ｓＰｓＳ１７．０软件。实验 数据用 ±ｓ表示，组间比较采用单因素方差分析。 尸＜０．０５为差异有统计学意义。 ２ 结果 试剂盒（ＴＡＫＡＲＡ公司，Ｊａｐａｎ）；其他试剂为国产分 析纯。 １．２ 方法 ２．１ 细胞分离培养及鉴定原代细胞在培养５～７ ｄ后，其生长形状呈典型的“峰一谷”样，镜下观察 细胞呈梭状结构，连续培养数代后仍然可以保持较 好的状态。经ＳＭ．仅．ａｃｔｉｎ染色法鉴定，细胞的胞浆 １．２．１ ＰＡＳＭＣｓ的原代培养及鉴定：以５％戊巴比妥 钠（每１Ｏ０ ｍｇ体质量０．７ ｍＬ，腹腔注射）麻醉大 鼠，开胸，镜下分离肺动脉，消化后进行细胞培养 并鉴定，方法同文献［７－８］。 着色，呈阳性反应者约９８％。高倍镜下观察，胞浆内 的平滑肌０【一肌动蛋白呈棕黄色，纤维细丝状，并与 细胞长轴平行，其胞核为淡蓝色，呈卵圆形居中［７＿８】。 ２．２ ｐ－ＥＲＫ蛋白表达量Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法检测结果 １．２．２实验分组：常氧对照组（Ｎ组）：５％Ｃ０２＋２１％ －－——４４５．－—— 第４３卷第７期 ２０１３年７月 温州医学院学报 ＶＯ１．４３ ＮＯ．７ Ｊｕ１．２０１３ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｗｅｎｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ 综上所述，ＥＲＫ１／２介导了大鼠ＨＨＰＶ，三ｔ皂苷 单体Ｒｇｌ可下调低０ 高ＣＯ 环境下的大鼠ＰＡＳＭＣｓ ２９—３２． ［７】 唐兰兰，郝卯林，黎关龙，等． 七皂苷单体Ｒｇ１对低氧高二 氧化碳肺动脉平滑肌细胞０３８ＭＡＰＫ表达的影响ｌＪｌ＿中国应 用生理学杂志，２０１２，２８（３）：２３０—２３３． ＥＲＫ１／２的表达（其浓度以４０ ｍｇ／Ｌ为最佳），可能是 其减轻ＨＨＰＶ的机制之一。 【８］ 王淑君，刘立宾，黎关龙，等．三七皂苷单体Ｒ１抑制低氧高 二氧化碳诱导的肺动脉平滑肌细胞０３８ＭＡＰＫ信号通路的活 化『Ｊ１＿中国病理生理学杂志，２０１２，２８ｆ１）：１０５—１０８． ［９］ Ｂｌａｓｃｈｋｅ Ｆ，Ｓｔａｗｏｗｙ Ｐ，Ｇｏｅｔｚｅ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｈｙｐｏｘｉａ ａｃｔｉｖａｔｅｓ 参考文献： Ｓｏｍｍｅｒ Ｎ，Ｄｉｅｔｒｉｃｈ Ａ，Ｓｃｈｅｒｍｕｌｙ ＲＴ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｙｐｏｘｉｃ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｖａｓｏｃｏｎｓｔｒｉｃｔｉｏｎ：ｂａｓｉｃ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ［Ｊ］． Ｅｕｒ Ｒｅｓｐｉｒ，２００８，３２（６）：１６３９—１６５１． ｏｃｈｅ Ｓ．Ｐｏｕｙｓｓｅｇｕｒ Ｊ．Ｔｈｅ ＥＲＫ１／２ ｍｉｔｏｇｅｎ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ 【２】 Ｍｅｌｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｐａｔｈｗａｙ ａｓ ａ ｍａｓｔｅｒ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｆ ｔｈｅ ＧＩ—ｔｏ ｂｅｔａ（１）一ｉｎｔｅｇｒｉｎ ｖｉａ ＥＲＫ １／２ ａｎｄ ｐ３８ ＭＡＰ ｋｉｎａｓｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ，２００２，２９６（４）：８９０—８９６． 【１０】Ｘｉａ Ｓ，Ｔａｉ Ｘ，Ｗａｎｇ ｅｔ ａ１．Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｇａｘ ｇｅｎｅ ｉｎ ｈｙｐｏｘｉａ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｓ－ｐｈａｓｅ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２００７，２６（２２）：３２２７—３２３９． Ｌ，Ｃｈａｐｍａｎ Ａ，Ｂｏｙｄ Ｒ，ｅｔ ａ１．ＥＲＫ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｃｏｎｔｆｉｂ— 【３】 Ｄｉｎｇ ｕｔｅｓ ｔｏ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ｃｏｎｔｒａｃｔｉｌｅ ｔｏｎｅ ｖｉａ ｓｕｐｅｒ— ｏｘｉｄｅ ａｎｉｏｎ ｉｎ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｒａｔ ａｏｒｔａ ｏｆ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ １Ｉ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ａｒｔｅｒｉａｌ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，２０１ １，４４（１）：６６—７３． ［１ １］陈雪彦，刘焕龙，潘振华，等．间尼索地平对５一羟色胺诱导 大鼠４市动脉平滑肌细胞增殖和迁移的影响及其机制［Ｊ１．中国 药理学通报，２０１０，２６（２）：２２６—２３０． 【１ ２］Ｗｅｌｃｈ ＬＣ，Ｌｅｃｕｏｎａ Ｅ，Ｂｒｉｖａ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｉｇｎａｌ— ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ（ＥＲＫ）ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｈｙｐｅｒｃａｐｎｉａ—ｉｎ— ｄｕｃｅｄ Ｎａ，Ｋ—ＡＴＰａｓｅ ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ，２０１０， ５８４ｆ １ ８１：３９８５—３９８９． ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ［Ｊ１．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒｃ Ｐｈｙｓｉｏｌ，２００７， ２９２（６）：Ｈ２９９７一Ｈ３００５． Ｍ，Ｌｉｕ Ｙ，Ｄｕｔｔ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ—ｉｎｄｕｃｅｄ ［４］ Ｌｉｍｉｔｏｇｅｎｅｓｉｓ，ｍｉｇｒａｔｉｏｎ，ａｎｄ ＥＲＫ ＭＡＰＫ ｎｕｃｌｅａｒ ｔｒａｎｓｌｏｃａ— ｔｉｏｎ ｉｎ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ，２００７，２９３（２）：Ｌ４６３一Ｌ４７ １． ［５】 朱阿楠，王万铁，林丽娜，等．ＭＡＰＫ通路抑制剂对低氧高二 ［１ ３］ 张经纬，王广基，孙建国．人参皂苷Ｒｇｌ的药效学和药代动 氧化碳性肺动脉收缩的影响…．中 病理生理学杂志，２００８， ２４ｆ８１：１５３８—１５４２． 力学研究进展『Ｊ１．中国药科大学学报，２００７，３８（３）：２８３—２８７． （本文编辑：丁敏娇） ［６】 朱阿楠，林丽娜，王万铁，等．三七总皂甙对低氧高二氧化 碳性肺血管收缩的影ｎ￣ｌＪ１．温州医学院学报，２００８，３８（１）： 消息 临床医学专业入选教育部“专业综合改革试 ●占＇－、、 ’ 项目 目前，教育部公布了“本科教学工程”地方高校第一批本科专业综合改革试点名单，全国地方高校共 有５５０个专业入选，我校临床医学专业榜上有名。 —－——４４７－－——