维普资讯 http://www.cqvip.com 第２ｏ卷第５期 山 东 科 学 Ｖｏ１．２０ Ｎｏ．５ ２ＯＯ７年ｌ０月 ＳＨＡＮＤ０ＮＧ ＳＣⅡ：ＮＣＥ ０ｃｔ．２００７ 文章编号：１００２－４０２６（２００７）０５・００２８・０４ 高效液相色谱法测定 愈风宁心分散片中葛根素的含量 郭敬兰，王希敏，刘可春 （山东省科学院生物研究所，山东济南２５００１４） 摘要：采用Ｃ１８色谱柱、十八烷基硅烷键合硅胶填充剂、甲醇一水（２４：７６）流动相、２５０ｒｉｍ的检测波长和 １．０ｍＬ／ｍｉｎ的流速，建立了高效液相色谱法测定愈风宁心分散片中葛根素含量的方法。结果表明葛根素检测 浓度在４０ １２０ｐｇ／ｍＬ的范围内线性关系良好，回归方程为Ｙ＝２３．３６３ｘ＋２０４．０９（ｒ＝０．９９９５），平均回收率为 ９９．５５％（ＲＳＤ＝０．９６％）。说明本方法操作简单、快捷，结果准确可靠。 关键词：高效液相色谱法；愈风宁心分散片；葛根素；测定 中图分类号：Ｒ２８４ 文献标识码：Ａ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ Ｐｕｅｒａｒｉｎ ｉｎ ａ Ｙｕｆｅｎｇ Ｎｉｎｇｘｉｎ Ｄｉｓｐｅｒｓｉｂｌｅ Ｔａｂｌｅｔ ｂｙ ＨＰＬＣ ＧＵＯ Ｊｉｎｇ－ｌａｎ，Ｗａｎｇ Ｘｉ—Ｍｉｎ，Ｌｉｕ Ｋｅ—Ｃｈｕｎ （Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆＢｉｏｌｏｇｙ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ａｃａｄｅｍｙ ｆｏ＆ ，Ｊ／ｎａｎ ２５００１４，Ｃｈｉａｎ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ ｐｒｅｓｅｎｔｓ ａｎ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ Ｐｕｅｒａｒｉｎ ｉｎ ａ Ｙｕｆｅｎｇ Ｎｉｎｇｘｉｎ ｄｉｓｐｅｒｓｉｂｌｅ ｔａｂｌｅｔ ｂｙ ＨＰＬＣ．ＯＤＳ Ｃ１８ ｃｏｌｕｍｎ，ｔｈｅ ｆｌｏｗ ｐｈａｓｅ ｏｆ ｍｅｔｈａｎｏｌ—ｗａｔｅｒ（２４：７６）ｗｈｏｓｅ ｐＨ ｉｓ ａｄｊｕｓｔｅｄ ｔｏ ３．９５ ｗｉｈｔ ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ一１．０ｍＬ／ｍｉｎ，ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ一２５０ｎｍ ａｒｅ ｅｍｐｌｏｙｅｄ．Ｔｈｅ ｍｓｕｈｓ ｓｈｏｗ ｔｈａｔ ｈｔｅｒｅ ｅｘｉｓｔｓ ａ ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｕｅｒａｒｉｎ ａｎｄ ｉｓｔ ｐｅａｋ ａｒｅａ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ４０—－１２０ｔ￣ｇ／ｍＬ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｒｅｇｒｅｓｓ ｅｑｕａｔｉｏｎ ｉｓ Ｙ ：２３．３６３ｘ＋２０４．ｏ９（ｒ：０．９９９５），ａｎｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ ｉｓ ９９．５５％（ＲＳＤ：０．９６％）． ｈＴｅ ｒｅａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｐｐｒｏａｃｈ ｉｓ ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ ｑｕｉｃｋ，ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｉｓ ｂｏｔｈ ａｃｃｕｒａｔｅ ａｎｄ ｔｍｓ ｏｒｔｈｙ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ＨＰＬＣ；Ｙｕｆｅｎｇ Ｎｉｎｇｘｉｎ ｄｉｓｐｅｓｉｂｌｅ ｔａｂｌｅｔ；ｐｕｅｒａｒｉｎ；ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ 愈风宁心分散片是由愈风宁心颗粒改变剂型而来的，由单味药葛根经提取加工制成。具有解痉止痛，增 强脑及冠状动脉血流量的功效，用于高血压、头晕、头痛、颈项强痛、冠心病、心绞痛、神经性头痛、早期突发性 耳聋等症…，临床应用多年，疗效突出，很受患者欢迎。做成分散片后既可加水口服，也可将其含于口中吮服 或吞服。具有崩解时间短、药物溶出迅速，服用方便，尤其适合老人、中风患者及吞服困难的患者服用。因葛 根中所含有效成分葛根总黄酮（其中以葛根素为代表）能降低心肌耗氧量，增加冠脉、脑血管血流量，明显缓 解心绞痛，抗心律失常等多种药理功能 Ｊ。为保证临床用药安全及产品质量，本文以葛根素为质量控制指 收稿日期：２００７－０３．０４ 作者简介：郭敬兰（１９６４一），女，助理研究员，研究方向为药物研发。 维普资讯 http://www.cqvip.com 第５期 郭敬兰，等：高效液相色谱法测定愈风宁心分散片中葛根素的含量 ２９ 标，建立了高效液相色谱法测定愈风宁心分散片中葛根素的含量，并对中国药典２００５年版第一部中愈风宁 心片中葛根素的含量测定方法作了进一步优化，以供药监部门参考。 ｌ仪器与试药 高效液相色谱仪及色谱工作站：大连依利特；电子天平：ＡＧ２０４型；酸度计：ＰＨＳ一３Ｃ；甲醇（色谱纯）；水为 纯化水；醋酸（分析纯）。葛根素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：０７５２—２００２０９），愈风宁心分散片（自 制，批号见表５）。 ２方法与结果 ２．１色谱条件 色谱柱为Ｃ１８柱（４．６ｍｍＸ １５０ｒａｍ，５ｔｍａ），填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为甲醇一水（２４：７６） （用醋酸调ｐＨ为３．９５）；流速为１．０ ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长为２５０ ｎｍ；进样量：１０，ｕＬ。 ２．２溶液的制备 ２．２．１对照品溶液的制备 取葛根素对照品１０ｒａｇ，精密称定，置２５ｍＬ量瓶中，加３０％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取２ｍＬ， 置１０ｍＬ量瓶中，加３０％乙醇至刻度，摇匀，即得（每ｌⅡｌＬ含葛根素８０ ）。 ２．２．２供试品溶液的制备 取愈风宁心分散片２０片，精密称定，研细，取细粉５０ｒａｇ，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加３０％乙醇 ５０ｍＬ，称定重量，超声处理２０ｍｉｎ，放冷，再称定重量，用３０％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即 得。 阴性对照溶液的制备：取不含葛根药材的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制得阴性对照溶液，即 得。 ２．３线性关系考察 精密称定葛根素对照品ｌＯｎｇ，置２５ｍＬ量瓶中，加３０％乙醇溶解，并稀释至刻度，摇匀。精密量取１，１．５， ２，２．５，３ｍＬ，分别置１０ｍＬ量瓶中，加３０％乙醇稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取１０，ｕＬ，注入液相色谱仪，记录 色谱图，以峰面积对浓度作曲线，用最／］，，－－－乘法计算回归方程，见图１。 结果表明：葛根素在样品浓度为４０～１２０ｐ．ｇ／ｍＬ的范 ４Ｏ０Ｏｒ 围内线性良好。 喜 ３２０００００ｆ０｝ ’ ２．４系统适用性试验 １０００ｒ １．．．．．．．．．．．．．． ０ ２０ ４０ ６０ ８０ ｌＯ０ ｌ２０ １４０ 分别精密吸取葛根素对照品溶液、供试品溶液及阴 浓度Ｃ（ｕｍ＇ｍＬ） 性对照溶液各１０，ｕＬ，在上述色谱条件下进样测定，得样 图１愈风宁心分散片含量线性图 品、对照品、阴性样品色谱图，见图２～４。可见，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上有相应的色 谱峰，而阴性对照无干扰。 ２．５ 精密度试验 表１愈风宁心分散片含量测定重复性试验 精密吸取同一供试品溶液１０，ｕＬ，连续进样 序号 １ ２ ３ ４ ５ ６ ＲＳＤ（％） ６次，记录色谱图，计算主峰面积的相对标准偏 峰面积２４２９．２４ ２４５６．００ ２４６１．９２ ２４２３．５５ ２４４７．７９ ２３９９．６８ ０．９６ 差，结果见表１。 表２愈风宁心分散片含量测定溶液稳定性试验结果 结果表明：仪器精密度良好。 ２．６稳定性试验 取同一供试品溶液，依法分别于０，２，４， ６，８ｈ测定，记录色谱图，计算主峰面积的相对标准偏差，结果见表２。 维普资讯 http://www.cqvip.com
３０ 山东科学 ２００７年 结果表明本品在８ｈ内稳定性良好。 。。。 。。 。。 。 。。 ［Ｍｉｎｕｔｅｓ】 图２供试品溶液ＨＰＬＣ色谱图 图３对照品溶液ＨＰＬＣ色谱图 ２．７重现性试验 取０５１１１６批样品５份，分别按供试品溶液制备 方法制成样品溶液，在上述色谱条件下测定，计算含 ￣（ｍｇ／片）的相对标准偏差，结果见表３。 表３愈风宁心分散片重现性试验 结果表明：方法重现性良好。 ［Ｍｉｎｕｔｅｓ］ 图４阴性对照品溶液ＨＰＬＣ色谱图 ２．８加样回收率试验 取０５１１１６批（含量：８．３５％）愈风宁心分散片适量，研细，精密称定细粉２０，２５，３０ｍｇ，分别置具塞锥形瓶 中，精密加葛根素对照品溶液（１．０ｍｓ／ｍＥ）各１．５，２．０，２．５ｍＬ，再分别精密加３０％乙醇５０ｍＬ，称定重量，超声 处理２０ｍｉｎ，放冷，再称定重量，用３０％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。 另精密称取葛根素对照品适量，加３０％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每ｌｍＬ含８０ｔ￣ｇ的对照品溶 液。精密吸取上述对照品溶液及供试品溶液各１０／￣Ｌ，注人液相色谱仪，记录色谱图。结果见表４。结果表明 葛根素回收率良好。 表４愈风宁心分散片回收率试验结果 维普资讯 http://www.cqvip.com 第５期 郭敬兰，等：高效液相色谱法测定愈风宁心分散片中葛根素的含量 ３１ ２．９样品含量测定 按溶液的制备方法分别制备供试品溶液及对照品溶液，精密吸取对照品溶液及供试品溶液各１０ ，注 入液相色谱仪，测定，１０批样品的含量测定结果见表５。 表５ ｌ０批愈风宁心分散片的含量测定结果 批号 ０５ｌ１１６ ０．３８ ４３９．７２ ０５ｌ】１７ ３９．７５ ３９．７４ ０５ｌ１２２ ３９．３２ 含量（ｍｇ） ４０．１５ 平均含量（ｍｇ） ０．２７４ 批号 ０５１１２１ 含量（ｍｇ） ３９．８９ 平均含量（ｍｇ） ３９．９７ ４０．０４ ３９．５３ ３９．４３ ３９．１５ ０５ｌ１１８ ３９．４７ ３９．０ｏ ０５１ｌ１９ ３９．０３ ３９．１８ ３９．Ｏ２ ０５１１２４ ３９．３１ ０５１１２３ ３９．２５ ３９．３３ ３９．０ ４３９．５６ ３９．４９ ３９．４２ ３９．６５ ０５１１２０ ３９．４８ ３９．３３ ０５ｌ１２５ ３９．４９ ３９．５７ 根据１０批样品２０个数据的含量测定结果，结果平均为３９．５ｍｇ／片，考虑含量测定过程中的操作误差、中 药材的质量及制剂生产制备工艺过程中的影响因素，在平均含量的基础上下浮约２０％，所以暂定本品每片 含葛根以葛根素（Ｃ２。Ｈ∞Ｏ９）计，不得少于３２．５ｍｇ。 ３讨论 中国药典２００５年版一部，愈风宁心片中葛根素含量的测定方法是以甲醇一水（２５：７５）为流动相。试验 结果表明：在此流动相下样品溶液色谱图中葛根素的吸收峰无法达到基线分离，因此我们参考文献资 料＿３ ］，对药典中的流动相进行了进一步优化，分别选用甲醇一水（２４：７６）、甲醇一水（２４：７６）（用醋酸调ＤＨ 值为３．９５）为流动相进行试验，结果以甲醇一水（２４：７６）（用醋酸调ｐＨ值为３．９５）的分离效果比较理想，相邻 两峰的分离度大于２，且耐受性好，本方法操作简便、快速、准确，可用于愈风宁心分散片的质量控制。 参考文献： ［１］国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）［Ｍ］．北京：化学工业出版社，２００５：６４６—６４７． ［２］安伟建，夏光成，郭瑞．不同产地葛根总黄酮含量的比较［Ｊ］．中国中药杂志，１９９９，２４（６）：３３９—３４０． ［３］肖学凤，高岚．ＨＰＬＣ法测定不同产地葛根中葛根素的含量［Ｊ］．中草药，２００１，３２（３）：２２０． ［４］梁军，郭卫东，高睿．冠脉宁软胶囊中葛根素含量测定［Ｊ］．辽宁中医杂志，２００６，３３（１２）：１６１９—１６２０． ［５］李文玉，李虎将，张邵帅．ＨＰＬＣ测定脑栓康复胶囊中葛根素的含量［Ｊ］．中成药，２００６，２８（１２）：１８３８—１８３９