一４６４一 重庆医科大学学报２０１３年第３８卷第５期（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ２０１３．Ｖｏ１．３８ Ｎｏ．５） ＤＯＩ：１０．１１６９９／ｃｙｘｂ２０１３０５０４ ＴＩＡＭ１基因与大肠癌上皮问质转化的相关性及其 相关ｍｉＲＮＡ的生物信息学分析 付（１．北京市海淀医院病理科，北京静 ，齐鲁ｚ，丁彦青。 ５１０５１５） １０００８０；２．南方医科大学基础医学院病理学系，广州５１０５１５； ３．南方医科大学南方医院病理科，广州【摘要】目的：对ＴＩＡＭ１基因进行生物信息学分析，探讨ＴＩＡＭＩ基因在大肠癌细胞中的生物学功能及其在细胞信号网络中的 作用。方法：通过ｍｉＲＮＡ预测工具预测与ＴＩＡＭ１相互作用的ｍｉＲＮＡ，通过ＴＩＡＭ１基因敲除的大肠癌细胞株ＳＷ４８０表达谱数 据分析与ＴＩＡＭＩ基因缺失相关的ｍｉＲＮＡ。综合２种分析．挑选出最可能与ＴＩＡＭ１相关的ｍｉＲＮＡ。预测此ｍｉＲＮＡ的靶基因，并 对靶基因进行通路富集，富集结果与ＴＩＡＭ１相互作用蛋白通路富集结果进行比较。将ＴＩＡＭ１缺失的ＳＷ４８０表达谱数据比野 生型ＳＷ４８０表达谱数据中对数比大于１的基因集进行通路富集。对ＴＩＡＭ１相互作用蛋白网络中的蛋白进行通路富集。对 ＴＩＡＭ１间接作用于上皮间质转化（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ．ＥＭＴ）标志物Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ和Ｖｉｍｅｎｔｉｎ的中间传递蛋白进行 通路富集。结果：直接预测与间接预测均表明ｍｉＲＮＡ ｈｓａ—ｍｉｒ一３４０最可能与ＴＩＡＭ１相互作用，通过通路富集结果的比较也发现 ｈｓａ—ｍｉｒ一３４０功能上与ＴＩＡＭ１协同。对ＴＩＡＭ１缺失的ＳＷ４８０表达谱数据分析发现，ＴＩＡＭ１缺失后Ｐ５３信号通路、ＤＮＡ损伤的 应答反应、Ｔｏｌｌ样受体信号通路等表达上调，表明ＴＩＡＭ１缺失可能与抑瘤作用增强相关。对ＴＩＡＭ１相互作用蛋白的通路富集可 以发现ＴＩＡＭ１相互作用蛋白参与了细胞黏附、细胞骨架重构、细胞增殖与生长等信号通路，与肿瘤的发生发展密切相关。对 ＴＩＡＭ１与ＥＭＴ标志物Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ和Ｖｉｍｅｎｔｉｎ的中间传递蛋白分析发现其主要由转化生长因子一［３（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ一１３， ＴＧＦ—Ｂ）受体、雄激素受体、核因子一ＫＢ（ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ—ＫＢ，ＮＦ—ＫＢ）、丝裂原活化蛋白激酶（ｍｉｔｏｇｅｎ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ， ＭＡＰＫ）等信号通路的成员构成。说明这些信号通路可能与ＴＩＡＭ１促进大肠癌ＥＭＴ的发生相关。结论：预测ｈｓａ—ｍｉｒ一３４０能够 调控ＴＩＡＭ１的表达，ＴＩＡＭ１的缺失可能导致抑瘤作用增强，ＴＩＡＭ１相互作用蛋白与肿瘤的转移密切相关。ＴＩＡＭ１可能通过 ＴＧＦ一１３受体、雄激素受体、ＮＦ—ＫＢ、ＭＡＰＫ等信号通路影响ＥＭＴ标志物Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ和Ｖｉｍｅｎｔｉｎ的功能，进而促进大肠癌ＥＭＴ 的发生和转移。 【关键词】ＴＩＡＭ１；大肠癌；转移；生物信息学 【中国图书分类法分类号】Ｒ７３５．３＋４ 【文献标志码】Ａ 【收稿日期】２０１２—１０—１ｌ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ＴｌＡＭ １ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＴｌＡＭ １ ｇｅｎｅ ｒｅｌａｔｅｄ—ｍｉ ＲＮＡ ＦＵ】 ｇ，ＱＩ Ｌｕ２ ＤＩＮＧ Ｙａｎｑｉｎｆ （』．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｈａｉｄｉａｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＰａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆＢａｓｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ；３．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＰａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ） 【Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ＴＩＡＭ１ ｇｅｎｅ ｉｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｏｌｅ ｉｎ ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｎｅｔｗｏｒｋ ｂｙ ｄｏｉｎｇ ｂｉｏｉｎｆｏｍｌａｔｉｃｓ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｆｉｒｓｔｌｙ，ｗｅ ｆｏｒｅｃａｓｔｅｄ ｔｈｅ ｍｉＲＮＡ ｗｈｉｃｈ ｉｎｔｅｒａｃｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｔ１ＡＭ１ ｂｙ ｍｉＲＮＡ ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ ｔｏｏｌｓ； ｔｈｅｎ ａｎａｌｙｚｅｄ ｔｈｅ ｎｆｉＲＮＡ ｗｈｉｃｈ ｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｏｆ ＴＩＡＭ １ ｂｙ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｆｉｌｅｓ ｏｆ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ＳＷ４８０ ｗｉｔｈ ｄｅｌｅｔｅｄ ＴＩＡＭ１；ｔｈｅｎ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｔｈｅ ｍｉＲＮＡ ｍｏｓｔ ｐｏｓｓｉｂｌｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＴＩＡＭ１ ｂｙ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｉｎｇ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｓｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｂｏｖｅ ｔｗｏ ａｎａｌｙｓｅｓ． Ｗｅ ｃｌａｒｉｉｆｅｄ ｔｈｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅｓｅ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅｓ ｂｙ ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ ｔｈｅ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅｓ ｏｆ ｈｓａ——ｍｉｒ——３４０ ａｎｄ ｄｏｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｗｅ ｍａｄｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＴＩＡＭ １．Ｗｅ ｃｌａｒｉｆｉｅｄ ｔｈｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｓｉｔｕａｔｉｏｎ ｗｈｉｃｈ ｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｏｆ ＴＩＡＭ １ ｂｙ ｓｅｌｅｃｔｉｎｇ ｔｈｅ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｓｗ４８０ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｗｉｔｈ ｄｅｌｅｔｅｄ ＴＩＡＭ１，ｗｈｏｓｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｆｉｌｅ ｌｏｇａｒｉｔｈｍｉｃ ｒａｔｉｏ ｗａｓ ｇｒｅａｔｅｒ ｔｈａｎ ｌ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈａｔ ｏｆ ｗｉｌｄ ｔｙｐｅ ｓｗ４８０ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ，ａｎｄ ｂｙ ａｎａｌｙｚｉｎｇ ｔｈｅ ｐａｔｈｗａｙ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｇｅｎｅｓ．Ｗｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｔｈｅ ｐａｔｈｗａｙ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ－ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｎｅｔｗｏｒｋ ｏｆ ＴＩＡＭ１．Ｗｅ ｔｈｅｎ ａｎａｌｙｚｅｄ ｔｈｅ ｐａｔｈｗａｙ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗｈｉｃｈ ｉｎｔｅｒａｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ＴＩＡＭ１ ｄｉ－ ｒｅｃｔｌｙ ａｎｄ ｉｎｄｉｒｅｃｔｌｙ ｔｏ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｍｅｓｅｎｃｈｙｎｍｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ（ＥＭＴ）ｍａｒｋｅｒｓ ｎａｍｅｄ Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ ａｎｄ Ｖｉｍｅｎｔｉｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｄｉｒｅｃｔ ａｎｄ ｉｎｄｉ一 作者介绍：付静．Ｅｍａｉｌ：ｙｘｌｘｆｗ＠１２６．ｃｏｎ． ｒｅｃｔ ｆｏｒｅｃａｓｔ ｄｅｍｏｓｎｔｅｒａｔｅｄ ｔｈａｔ ｍｉｃｒｏＲＮＡ ｈｓａ——ｍｉｒ——３４０ ｃａｎ ｉｎｔｅｒａｅｔ ｗｉｔｈ ＴＩＡＭ１ ａｎｄ ＣＯＯｒｄｉｎａｔｅ ｗｉｔｈ ＴＩＡＭｌ ｏｎ ｔｈｅ ｆｕＢｅ— ｔｉｏｎ．Ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＳＷ４８０ ｗｉｔｈ ｄｅｌｅｔｅｄ ＴＩＡＭ ｌ，ｅｘ— ｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ Ｐ５３ ｓｉｇｎａｌ ｐａｔｈｗａｙ，ＤＮＡ ｄａｍａｇｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ，ａｎｄ 研究方向：胃肠道肿瘤病理。 通信作者：丁彦青．Ｅｍａｉｌ：ｄｙｑ＠ｆｉｍｍｕ．ｃｏｍ。 基金项目：国家自然科学基金资助项目（编号：３０３７０６４９）。 重庆医科大学学报２０１３年第３８卷第５期（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ２０１３．Ｖｏ１．３８ ＮＯ．５） 一４６５一 Ｔｏｌｌ—ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｇｎａｌ ｐａｔｈｗａｙ ｗｅｒｅ ｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄ，ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ ｄｅｌｅｔｅｄ ＴＩＡＭ１ ｍａｙ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｕｍｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｐａｔｈｗａｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｒｅｓｕｌｔｓ，ＴＩＡＭ １ ｇｅｎｅ ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅｄ ｉｎ ａ ｌｏｔ ｏｆ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ ｓｕｃｈ ａｓ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ，ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ， ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ，ｅｔｃ ａｎｄ ｗａｓ ｐｏｓｓｉｂｌｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃａｎｃｅｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．ＴＩＡＭ １ ａｎｄ ＥＭＴ ｍａｒｋｅｒｓ Ｅ—ｃａｄｈｅｆｉｎ ａｎｄ Ｖｉｍｅｎｔｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｎｅｔｗｏｒｋ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｅｒｅ ｔｈｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｍｅｍｂｅｒｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｔｈ ｗｆａｃｔｏｒ—ｐ（ＴＧＦ—ｐ）ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ａｎｄｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐ— ｔｏｒ，ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ—ＫＢ（ＮＦ—ＫＢ），ｍｉｔｏｇｅｎ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ（ＭＡＰＫ），ｅｔｃ．Ｔｈｅｓｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ ｗｅｒｅ ｐｏｓｓｉｂｌｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｏｅｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ＥＭＴ ｏｆ ｃｏｌｏｒｅｃｔｌ ｃａｎｃｅｒ．Ｃｏｎｃｌａｕｓｉｏｎｓ：Ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ ｈｓａ－ｍｉｒ－３４０ ｃａｎ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ＴＩＡＭ １．ＴＩＡＭ １ ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｍａｙ ｃｏｒｒｅｌａｔｅ ｗｉｔｈ ｔｕｍｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｎｄ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＴＩＡＭ１ ｈａｓ ｃｌｏｓｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗｉｔｈ ｃａｎｃｅｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ． ＴＩＡＭ１ ｃａｎ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ＥＭＴ ｍａｒｋｅｒｓ Ｅ－ｃａｄｈｅｆｉｎ ａｎｄ Ｖｉｍｅｎｔｉｎ ａｎｄ ｐｒｏｍｏｔｅ ｔｈｅ ｃｏｌｏｒｅｃｔｌ ｃａｎｃｅｒ ｏｃｃｕｒａｒｅｎｃｅ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｂｙ ａｆｆｅｃｔｉｎｇ ＥＭＴ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ ｓｕｃｈ ａｓ ＴＧＦ－￣ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ａｎｄｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＮＦ—ｋＢ，ＭＡＰＫ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ＴＩＡＭ１；ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ；ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ；ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ＴＩＡＭ１基因与多种肿瘤转移密切相关．已有研 究表明ＴＩＡＭ１基因的高表达与肿瘤细胞侵袭、运 动、迁移、细胞骨架重构及伪足形成相关【”。大肠癌是 大肠黏膜上皮起源的恶性肿瘤，是最常见的消化道 恶性肿瘤之一。其恶性程度较高，易经血道、淋巴道 转移。转移是大肠癌患者的主要死因。因此明确大 肠癌转移的分子机制，能够更清晰地认识大肠癌转 移的方式，更好地去寻找抑制肿瘤转移的方法。因 此研究转移相关基因ＴＩＡＭ１在大肠癌转移中的表 达调控，对阐明大肠癌转移机制有着重要作用。 上皮间质转化（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉ— ｔｉｏｎ。ＥＭＴ）是肿瘤转移中重要的表型变化，上皮来 源的肿瘤通过ＥＭＴ可获得问叶性肿瘤的表型。ＥＭＴ 可使肿瘤细胞骨架重构，极性消失，黏附能力减弱， 侵袭能力增强。研究表明，ＴＩＡＭ１能通过ＥＭＴ促进 大肠癌的转移［２＿３】，其表达会影响ＥＭＴ标志物功能 变化 ，ＥＭＴ的关键标志物中Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ为上皮性 的标志物同，Ｖｉｍｅｎｔｉｎ为间叶性的标志物 。ＴＩＡＭ１ 很可能通过影响这２种标志物的表达变化促进大 肠癌的上皮问质转化．但ＴＩＡＭ１并不是通过直接作 用的方式影响ＥＭＴ的标志物发挥作用，而是通过 多个蛋白相互作用传递而间接地影响ＥＭＴ标志物 的功能。因此。研究这些相互作用传递过程中的中 间相互作用蛋白所参与的信号通路和功能，就能阐 明ＴＩＡＭ１通过哪种通路传递而影响ＥＭＴ标志物的 功能。因此通过分析ＴＩＡＭ１与ＥＭＴ的分子标志物 Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ和Ｖｉｍｅｎｔｉｎ之间的关系就能明确ＴＩＡＭ１ 对大肠癌ＥＭＴ的影响。 １材料和方法 首先通过ＤＩＡＮＡ－ｍｉｃｒｏＴ ｖ３．０工具、ｍｉＲａｎｄａ工具、ｍｉＲｂ 工具预测与ＴＩＡＭ１相互作用的共同ｍｉＲＮＡ。其次。对敲除 ＴＩＡＭ１基因的人大肠癌细胞株ＳＷ４８０与野生型ＳＷ４８０细胞 株进行表达谱芯片分析，芯片公司为上海晶泰生物技术有限 公司。其中敲除ＴＩＡＭ１基因的人大肠癌细胞株ＳＷ４８０表达 谱数据标记为ＳＷ４８０ＮＵＬＬ．野生型ＳＷ４８０细胞株表达谱数 据标记为ｓｗ４８０ｃ０ＮＴＲ０Ｌ。将ＳＷ４８０ＮＵＬＬ数据比ＳＷ４８０ ＣＯＮＴＲＯＬ的数据中已标记的表达上调与下调的基因作为差 异表达基因，将对数化后比值为０的数据作为稳定表达基 因。将上述差异表达基因与稳定表达基因通过ＤＩＡＮＡ— ｍｉｃｒｏＴ ｖ３．０工具对差异表达基因的３’ＵＴＲ区域的核酸六聚 体的频率进行统计分析。通过多种工具的直接预测以及 ＴＩＡＭ１缺失相关差异表达基因集的间接预测，得到与ＴＩＡＭ１ 最相关的ｍｉＲＮＡ为ｈｓａ—ｍｉＲ一３４０。 将ＳＷ４８０ＮＵＬＬ数据比ｓｗ４８０ｃ０ＮＴＲ０Ｌ的数据中对数 比大于１的基因进行通路富集分析，明确与ＴＩＡＭ１缺失相关 的信号通路睛况。其次通过ＶＩＳＡＮＴ工具分析ＴＩＡＭ１的相互 作用蛋白，并对每个相互作用蛋白进一步展开，得到ＴＩＡＭ１的 间接相互作用蛋白，提取出这些直接或者间接相互作用蛋白 数据进行通路富集分析。明确ＴＩＡＭ１所参与的信号调控网络 所在的通路情况。通过ＤＩＡＮＡ—ｍｉｃｒｏＴ ｖ３．０工具预测ｈｓａ— ｍｉｒ一３４０的靶基因．对靶基因进行通路富集分析，明确ｈｓａ— ｍｉｒ－３４０调控的靶基因所参与的信号通路情况。通路富集分 析工具为Ｇｅｎｅ Ｓｅｔ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｔｏｏｌｋｉｔ Ｖ２。 通过ＶＩＳＡＮＴ工具分析ＴＩＡＭ１与ＥＭＴ标志物Ｅ—ｃａｄ— ｈｅｒｉｎ和Ｖｉｍｅｎｔｉｎ之间的蛋白相互作用网络，然后将每个相互 作用蛋白进一步展开，得到更多相互作用网络，再计算ＴＩＡＭ１ 间接地连接到Ｅ—ｃａｄｈｅｆｉｎ和Ｖｉｍｅｎｔｉｎ之间的多个中间蛋白 节点，将这些中间蛋白提取出来进行通路富集。明确ＴＩＡＭ１ 影响这２种重要ＥＭＴ标志物过程中所涉及的信号通路。 ２结果 ２．１ 与ＴＩＡＭ１相互作用的ｍｉＲＮＡ预测结果 利用ＤＩＡＮＡ—ｍｉｃｒｏＴ ｖ３．０ 工具对ＴＩＡＭ１基因相互作用 ｍｉＲＮＡ进行预测．总共找到了２９个ｍｉＲＮＡ，其中得分最高 的ｍｉＲＮＡ为ｈｓａ—ｍｉＲ一３４０。通过ｍｉＲＧｅｎｒ９１和ｍｉＲｂ［ ｑ的预测 结果均含有ｈｓａ—ｍｉＲ一３４０，说明此ｍｉｃｒｏＲＮＡ为３种工具共 同预测的靶向ＴＩＡＭ１的ｍｉｃｒｏＲＮＡ。 对ＴＩＡＭ１缺失的大肠癌细胞株表达谱数据中差异表达 一４６６一 重庆医科大学学报２０１３年第３８卷第５期（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ２０１３．Ｖｏ１．３８ Ｎｏ．５） 基因集的３’ＵＴＲ区域的核酸六聚体的频率进行统计分析，结 通路情况，用Ｇｅｎｅ Ｓｅｔ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｔｏｏｌｋｉｔ Ｖ２工具得到与ＴＩＡＭ１ 功能相关的信号通路分别为：ＥＧＦＲ１ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ、Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ、Ｂ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ、 果发现核酸六聚体频率较高的几个六聚体分别为：ＴＴＡＴＡＴ、 ＴＧＴ丌ｌＡ、ＴＧＴ＿丌Ａ、ＡＴＧＴ丌、ＡＴｒｒＩｒｒ、ＡＴＧＴ１Ｔｒ、ＴＡＴＡＴＩ＂、Ｔ丌’ ＧＴＡ、ＴｒｒＡＴＡ、ＴＧＴＴＴＡ、 ｒｒｒＧＴＡ、ＴＴＡＴＡＴ、ＴＡＴＧ１Ｔｒ、ＴＧＴＴ— ｉｎｓｕｌｉｎ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、ＭＡＰＫ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ、ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ、ＴＧＦ一 ＴＡ、ＴＧ１ＷＡ。对应于ｍｉＲＮＡ可以发现ｈｓａ—ｍｉＲ一３４０所含有 ８ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ、ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｃｔｉｎ ｃｙｔｏ—ｓｋｅｌｅｔｏｎ。 相应六聚体的频率很高（表１），进一步说明了ＴＩＡＭ１为ｈｓａ— ｍｉＲ一３４０的靶基因 ２．２与ＴＩＡＭ１相关基因的通路富集分析结果 通过ＤＩＡＮＡ—ｍｉｃｒｏＴ ｖ３．０工具预测ｈｓａ—ｍｉｒ一３４０的靶基 见表２。 通过比较上述２种通路富集的结果，可以发现，ｈｓａ— ｍｉｒ一３４０的靶基因所参与的信号通路与ＴＩＡＭ１相互作用蛋 白所参与的信号通路很相似，说明了ｈｓａ—ｍｉｒ一３４０在功能上 因。总共可以找到有３ ２９６个核酸六聚体作用位点分别位于 １ ３１３个靶基因中。对这１ ３１３个靶基因通过Ｇｅｎｅ Ｓｅｔ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｔｏｏｌｋｉｔ Ｖ２工具综合ＫＥＧＧ Ｐａｔｈｗａｙ和Ｗｉｋｉｐａｔｈｗａｙｓ数据库 进行通路富集分析。得到的相关性较高的信号通路分别为： ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ、ＴＧＦ＿Ｂ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ、ＥＧＦＲ１ ｓｉｇｎａｌ－ ｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎｔｅｇｒｉｎ－ｍｅｄｉ— 与ＴＩＡＭ１相关。这些信号通路主要参与了细胞黏附、细胞骨 架重构、细胞增殖与生长，与肿瘤的发生发展密切相关。综上 所述．通过多种分析工具的直接预测，通过ＴＩＡＭ１缺失的大 肠癌细胞株表达谱数据中差异表达基因集的３’ＵＴＲ区域的 核酸六聚体的频率的计算，以及通过预测出的ｈｓａ—ｍｉｒ一３４０ 的靶基因所参与的信号通路与ＴＩＡＭ１相互作用蛋白所参与 的信号通路的相似程度，预测ｈｓａ—ｍｉｒ－３４０在ＴＩＡＭ１基因对 ａｔｅｄ ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ、Ｂ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ、ｗｎｔ ｓｉｇ— ｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ、ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｃｔｉｎ ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ、ＭＡＰＫ ｓｉｇｎａｌ－ 大肠癌转移的作用中可能起到关键作用。 将ＳＷ４８０ＮＵＬＬ数据比ＳＷ４８０ＣＯＮＴＲＯＬ的数据中对数 比大于１共８９１个基因通过Ｇｅｎｅ Ｓｅｔ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｔｏｏｌｋｉｔ Ｖ２综 ｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ。见表２。 ＶＩＳＡＮＴ软件可以分析蛋白间的相互作用，并且这种相 互作用均为生物学实验所证实ｌｌ１］，通过ＶＩＳＡＮＴ软件分析 ＴＩＡＭ１的相互作用蛋白，并将每个相互作用蛋白展开。得到 与ＴＩＡＭ１直接和间接相互作用蛋白总共２ ３７７个，对这些蛋 合ＫＥＧＧ ｐａｔｈｗａｙ和Ｗｉｋｉｐａｔｈｗａｙｓ数据库进行通路富集分 析。结果可以得出这些基因所参与的信号通路为：ｐ５３ ｓｉｇ— ｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ、ＤＮＡ ｄａｍａｇｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ、Ｔｏｌｌ—ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｇ－ ｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ、ｉｎｓｕｌｉｎ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、ＥＧＦＲ１ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ、 白进行通路富集分析，可以明确ＴＩＡＭ１所参与的细胞信号 表１ 差异表达基因中核酸六聚体的富集情况 Ｔａｂ．１ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ｏｆ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｈｅｘａｍｅｒ ｉｎ ｇｅｎｅｓ ｗｉｔｈ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ 表２ ｈｓａ—ｍｉｒ一３４０靶基因与ＴＩＡＭ１相互作用蛋白的通路富集情况 Ｔａｂ．２ Ｐａｔｈｗａｙ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ｏｆ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅｓ ｏｆ ｈｓａ－ｍｉｒ－３４０ ａｎｄ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ＴＩＡＭ１ ｈｓａ－ｍｉｒ一３４０靶基因通路富集情况Ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ＴＩＡＭ１相互作用蛋白通路富集情况 Ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ＴＧＦ—Ｂ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ＥＧＦＲ１ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐ￣ｈｗａｙ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ Ｂ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ Ｒｅｇｎｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｃｔｉｎ ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ ＭＡＰＫ ｓｉｎａｇｌｉｎｇ ｐｍｈｗ￣ ＴＧＦ－￣ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｎａｌｇｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ＥＧＦＲ１ ｓｉｎａｌｇｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ Ｂ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｎａｌｇｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｃｔｉｎ ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ ＭＡＰＫ ｓｉｎａｇｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ Ｉｎｓｕｌｉｎ ｓｉｎａｇｌｉｎｇ Ｉｎｔｅｇｒｉｎ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ Ｗｎｔ ｓｉｎａｇｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ 重庆医科大学学报２０１３年第３８卷第５期（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ２０１３．Ｖｏ１．３８ Ｎｏ．５） ．．．——４６９－－－—— ＤＯＩ：１０．１ １６９９／ｃｙｘｂ２０１３０５０５ ＳＴＡＴ３特异性抑制剂ＳＴＡ一２ １对乳腺癌ＭＣＦ－７Ｂ细胞 增殖及凋亡的影响 白 璐 ，朱静 ，田 杰ｚ，崔向荣 ，张春敏 ，尹耐靖 ４０００１４） （重庆医科大学附属儿童医院１．儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室；２．心血管内科，重庆【摘要】目的：探讨信号传导与转录活化因子３（ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒｓ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｏｒｓ ｏｆｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ３，ＳＴＡＴ３）特异性抑制剂ＳＴＡ一 ２１对乳腺癌ＭＣＦ一７Ｂ细胞增殖及凋亡的影响。方法：空白组为单独培养ＭＣＦ一７Ｂ细胞，实验组采用不同浓度ＳＴＡ一２１作用于乳 腺癌ＭＣＦ一７Ｂ细胞后，用ＭＴＩ＂法观察ＳＴＡ一２１对ＭＣＦ一７Ｂ细胞生长抑制的作用；流式细胞仪检测细胞周期及凋亡；Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ＭＣＦ一７Ｂ细胞Ｐ—ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ３、细胞周期蛋白Ｄ１（ＣｙｃｌｉｎＤ１）、Ｂｃｌ—ｘｌ蛋白的表达。结果：ＭＣＦ一７Ｂ细胞经各浓度ＳＴＡ一 ２１（１０、３０、５０ ｔＬｍｏｌ／Ｌ）作用后，其细胞增殖的抑制率及细胞凋亡率较空白组明显增加（Ｐ＝０．０００）；流式细胞仪检测发现ＳＴＡ一２１可 导致ＭＣＦ一７Ｂ细胞阻滞于Ｇ１期：Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ结果显示与空白组相比，ＳＴＡ一２１可降低ＭＣＦ一７Ｂ细胞Ｐ—ＳＴＡＴ３、ＣｙｃｌｉｎＤ１、Ｂｃｌ— ｘｌ蛋白的表达（Ｐ＝０．０００），但对ＳＴＡＴ３蛋白的表达基本无影响（Ｐ＝０．３６７）。结论：ＳＴＡ一２１可在一定程度上抑制ＭＣＦ一７Ｂ细胞的 增殖及促进凋亡，其作用机制可能与抑制ＳＴＡＴ３活性有关。 【关键词】ＭＣＦ一７Ｂ细胞；信号传导与转录活化因子３；ＳＴＡ一２１；抑制 【中国图书分类法分类号】Ｒ７３７．９ 【文献标志码】Ａ 【收稿日期】２０１２—１２－２８ 作者介绍：白璐，Ｅｍａｉｌ：ｂｌｕｅｂｍｗ８５９１２＠ｓｉｎａ．ｃｏｉｎ， 研究方向：骨髓间充质干细胞瘤样转化的规避与机制研究。 通信作者：朱静，Ｅｍａｉｌ：ｚｈｕｊｉｎｇ３１０＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｎ．ｃｎ。 基金项目：国家自然科学基金资助项目（编号：３１１４００３５）；重庆市 自然科学基金资助项目（编号：ｃｓｔｃ２０１ｌｊｊＡ１００６０）。 ［５］赵海燕，胡洁，王雅娟，等．Ｔｉａｍｌ和ＳＮＡＩｌ在结直肠癌ＥＭＴ ｉｎｇ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓ ｏｎ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｐａｔｈｗａｙｓ［Ｊ［．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ， ２０１２，４０（Ｄａｔａｂａｓｅ ｉｓｓｕｅ）：Ｄ１３０１－１３０７． ［１３］Ｘｕ Ｋ，Ｒ￣ａｇｏｐａｌ ｓ，Ｋｌｅｂｂａ Ｉ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｉｆｂｒｏｂｌａｓｔ Ｔｉａｍｌ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ［１］．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２０１０，２９（５０）：６５３３— ６５４２． 中的意义［ 肿瘤防治研究，２０１１，３８（６）：６５４—６５７． Ｚｈａｏ Ｈ Ｙ，Ｈｕ Ｊ，Ｗａｎｇ Ｙ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ Ｔｉａｍｌ ａｎｄ ＳＮＡＩｌ ｉｎ ＥＭＴ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ［．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ０ｎ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，２０１１，３８（６）：６５４—６５７． ［６］Ｔｈｅｙｓ Ｊ，Ｊｕｔｔｅｎ Ｂ，Ｈａｂｅｔｓ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ｅ－Ｃａｄｈｅｎｎ ｌｏｓｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＥＭＴ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｒａｄｉｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ『Ｊ】．Ｒａｄｉｏｔｈｅｒ Ｏｎｃｏｌ， ［１４】Ｈｕ Ｊ，Ｗａｎｇ Ｙ Ｄ，Ｌｉ Ｙ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｍａ ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ １ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ——ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎ—— ２０１１，９９（３）：３９２－３９７． ［７］Ｉｖａｓｋａ Ｊ．Ｖｉｍｅｎｔｉｎ：ｃｅｎｔｒａｌ ｈｕｂ ｉｎ ＥＭＴ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ？［Ｊ］．Ｓｍａｌｌ ＧｔＰａｓ— ｅｓ，２０１１，２（１）：５１－５３． ［８］Ｍａｒａｇｋａｋｉｓ Ｍ，Ｒｅｃｚｋｏ Ｍ，Ｓｉｍｏｓｓｉｓ Ｖ Ａ，ｅｔ ａ１．ＤＩＡＮＡ－ｍｉｃｒｏＴ ｗｅｂ ｓｅｒｖｅｒ：ｅｌｕｃｉｄａｔｉｎｇ ｍｉｃｒｏＲＮＡ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔａｒｇｅｔ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ［Ｊ［．Ｎｕ— ｓｉｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２００９，２９（２）：２３２－２３５． ［１５］Ｌｉｕ Ｄ Ｚ，Ｗａｎｇ Ｙ Ｓ，Ｊｉ Ａ Ｇ．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ＴＧＦ—ｂｅｔａ ｉｎ ｔｈｅ ＥＭＴ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ［Ｊ［．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１１，４２（６）：４６３—４６６． 【１６】Ｚｈｕ Ｍ Ｌ，Ｋｙｐｒｉａｎｏｕ Ｎ．Ｒｏｌｅ ｏｆ ａｎｄｒｏｇｅｎｓ ａｎｄ ｔｈｅ ａｎｄｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐ— ｔｏｒ ｉｎ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ—ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａ１ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ，２００９，３７（Ｗｅｂ ｓｅｒｖｅｒ ｉｓｓｕｅ）：Ｗ２７３－２７６． ［９］Ａｌｅｘｉｏａ Ｐ，Ｖｅｒｇｏｕｌｉｓ Ｔ，Ｇｌｅｄｉｔｚｓｃｈ Ｍ，ｅｔ ａ１．ｍｉＲＧｅｎ ２．０：ａ ｄａｔａｂａｓｅ ｃｅｌｌｓ［Ｊ［．ＦＡＳＥＢ Ｊ，２０１０，２４（３）：７６９—７７７． ［１７］Ｌｉ Ｃ Ｗ，Ｘｉａ Ｗ，Ｈｕｏ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ—ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＴＮＦ－ａｌｐｈａ ｒｅｑｕｉｒｅｓ ＮＦ－ｋａｐｐａＢ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｏｆ ｍｉｃｒｏＲＮＡ ｇｅｎｏｍｉｃ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｇｎｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ， ２０１０，３８（Ｄａｔａｂａｓｅ ｉｓｓｕｅ）：Ｄ１３７—１４１． ［１０］Ｌａｇａｎａ Ａ，Ｆｏｎｅ Ｓ，Ｇｉｕｄｉｃｅ Ａ，ｅｔ ａ１．ｍｉＲｏ：ａ ｍｉＲＮＡ ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｗｉｓｔ１［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２０１２，７２（５）：１２９０—１３００． ［１８］Ｍｕｌｈｏｌｌａｎｄ Ｄ Ｊ，Ｋｏｂａｙａｓｈｉ Ｎ，Ｒｕｓｃｅｔｔｉ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｐｔｅｎ ｌｏｓｓ ａｎｄ ＲＡＳ／ＭＡＰＫ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｃｏｏｐｅｒａｔｅ ｔｏ ｐｒｏｍｏｔｅ ＥＭＴ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｉｎｉｔｉ— ｂａｓｅ［Ｊ［．Ｄａｔａｂａｓｅ（Ｏｘｆｏｒｄ），２００９，２００９：８． ［１１】Ｈｕ Ｚ，Ｈｕｎｇ Ｊ Ｈ，Ｗａｎｇ Ｙ，ｅｔ ａ１．ＶｉｓＡＮＴ ３．５：ｍｕｌｔｉ－ｓｃａｌｅ ｎｅｔｗｏｒｋ ｖｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎ，ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｉｎｆｅｒｅｎｃｅ ｂａｓｅｄ ｏｕ ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｏｎｔｏｌｏｇｙ［Ｊ［．Ｎｕ— ｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２００９．３７（Ｗｅｂ Ｓｅｒｖｅｒ Ｉｓｓｕｅ）：ｗ１１５—１２１． 【１２］Ｋｅｌｄｅｒ Ｔ，ｖａｎ Ｉｅｒｓｅｌ Ｍ Ｐ，Ｈａｎｓｐｅｒｓ Ｋ，ｅｔ ａ１．ＷｉｋｉＰａｔｈｗａｙｓ：ｂｕｉｌｄ— ａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｓｔｅｍ／ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ［Ｊ［．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２０１２，７２ （７）：１８７８－１８８９． （责任编辑：冉明会）