你了解PCR,qPCR,dPCR它们有什么区别

上世纪八十年代的化学家发明了PCR，如今DNA扩增俨然已经成为了生物学研究的基础。三十多年以来，人们为了解决研究中出现的新问题新需求，不断对这一经典技术进行改良。从经典PCR、实时定量PCR再到现在的数字PCR，qPCR和dPCR，它们之间都有什么区别呢，接下来就为大家详细的讲解一下，希望对大家有所帮助。

PCR的原理在这里无庸赘述。多年来，研究者们已经在此基础上开发了一系列衍生技术。目前的PCR方法主要可以分为三类：终点PCR、qPCR和dPCR。

终点PCR是最原始、最简单的PCR方法，如今仍在被我们广泛使用。使用者只能在PCR反应结束之后，通过凝胶电泳、毛细管电泳等方法对产物进行检测。终点PCR本身是无法定量的，因为该反应产出的DNA量不一定能反映最初情况。举例来说，不同样品和序列的扩增效率是有差异的。

研究者们通过两种途径克服了PCR定量分析的挑战：实时定量PCR（qPCR）和数字PCR（dPCR）。qPCR主要是利用插入性染料或荧光探针（比如TaqMan），人们可以通过监控PCR过程中的荧光强度比较多个样品的DNA水平。数字PCR（dPCR）的基本工作原理很简单，先将样品划分为多个PCR反应，每个反应最多只含有一个模板。然后通过计数正负反应来确定初始样品中模板分子的数量。

虽然qPCR和dPCR都能够对样品中的核酸进行定量，但它们有一个重要的差别。qPCR只能实现相对定量，除非用标准品生成一个标准曲线。而数字PCR本身就是绝对定量的，不需要做标准曲线。另一方面，qPCR技术更为成熟名头也更响，市面上有大量的商业化产品可供选择。

dPCR一般来说更为精确。qPCR能够轻易分辨两倍的浓度差异，但在微小差异面前比较无力。而dPCR在理论上能鉴别差异小于20%的拷贝数，比如5拷贝和6拷贝。这种精确性在有些方面特别有帮助，比如定量涉及染色体重排基因拷贝数，或者定量癌症患者血液中的循环生物学指标。由于dPCR分液相当于稀释样品，而且在反应结束时读取数据，dPCR比qPCR更能抵抗抑制剂。

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