今日健康 ・２０１４年２月第１３卷第２期 ２１２・ ＪＩＮｍ ＪＩＡＮＫＡＮＧ Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２０１４ Ｖｏ１．１３ Ｎｏ．２ 中医热哮大鼠模型的建立 严郑元 （安徽中医药大学，安徽合肥，２３００３８） 【摘要】 目的：探索建立符合中医热哮临床发病特点的大鼠模型。方法：雄性ＳＤ大鼠４０只，随机分为正常组、模型组、麻杏石 甘汤组、地塞米松组，每组１０只。以卵蛋白联合细茵脂多糖（ｒｌ，ｓ）制造大鼠热哮模型。最后观察肺组织病理学形态变化，定量检测肺组 织免疫球蛋白ＩｇＥ和羧肽酶（ｃｅ）的表达变化。结果：模型组发生明显肺组织炎症反应，其肺组织中ｔｇＥ、ＣＰ表达水平显著升高（Ｐ＜０． ０１）；治疗后，ＩｇＥ、ＣＰ显著降低（Ｐ＜０．０１）。结论：大鼠肺组织中中性粒细胞（ＰＭＮ）、ＩｇＥ和ＣＰ浓度及肺组织的病理改变可能成为中医热 哮动物模型的主要评价指标。 【关键词】 热哮ＰＭＮ ＩｇＥ ＣＰ 【中图分类号】 Ｒ２４２ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】 １６７卜５１６ｏ（２０１ ４）０２—０２１２—０１ 差（ｉ± ）表示。多组资料比较采用方差分析，组间比较采用ＬＳＤ，当Ｐ＜ ０．０５为有统计学差异，当Ｐ＜０．Ｏ１为有显著性差异。 中医认为。热哮是风热侵袭于肺，引触“伏痰”，痰随气升，壅阻气 道，导致肺失肃降，气道挛急，发为热哮。国外学者发现，哮喘发作患者， 感染致哮喘急性发作患者诱导痰中ＰＭＮ明显增加，而非感染性哮喘患 ２结果 ２．１病理形态学改变 者痰液则以ＥＯＳ增加为主。在此过程中，内有宿痰，外感风热引发感染 而致ＰＭＮ局部募集侵润是热哮发作的关键病机，热哮型白细胞计数、中 性粒细胞检测值明显高于其他各型【ｌ】。笔者紧扣这一病机，模拟热哮证的 正常组大鼠肺组织支气管和肺泡结构清晰，气道纤毛上皮排列整 齐，管壁完整，无明显炎症改变及胶原纤维沉积，基底膜较薄；模型组大 鼠支气管壁增厚，粘膜上皮杯状细胞增生，支气管及肺血管周围有大量 炎症细胞浸润，除嗜酸细胞外，还可见较多中性粒细胞、淋巴细胞在气道 粘膜及粘膜下浸润，肺泡间隔不同程度增宽，部分断裂；麻杏石甘汤组大 鼠支气管壁稍增厚，管腔内见少许粘液，粘膜下、肺泡间质见少量中性 形成条件，探索建立符合中医临床发病规律的热哮病证结合的大 鼠模型。 １材料与方法 １．１药物 麻杏石甘汤方药组成：麻黄、杏仁、石膏、炙甘草。饮片来源：安徽中 医药大学国医堂制剂中心；地塞米松片：上海信谊药业有限公司产品，批 号：０３００４０２。 粒、嗜酸性粒细胞及淋巴细胞浸润，结构较完整。地塞米松组大鼠管腔结 构较完整，支气管管壁稍增厚，支气管周围炎症细胞浸润较模型组减少， 粘膜下层及肺泡间质见少许中性粒细胞、嗜酸细胞及淋巴细胞浸润。 １．２试剂与仪器 ２．２一般体征观察；大鼠出现发热、烦躁、口渴、点头、呛咳、节律性收腹 样喘促等一系列热哮模型复制成功症状。 ２．３肺组织ＩｇＥ、ＣＰ浓度检测（ＥＬＩＳＡ法）： 结果见表１，模型组与正常组比较，ＩｇＥ、ＣＰ表达均比正常组高（Ｐ 卵白蛋白（ｓｉｇｍａ），ＬＰＳ（ｓｉｇｍａ公司），醋酸地塞米松片（上海信谊药 业有限公司产品）。Ｒａｔ ＣＰ ＥＬＩＳＡ试剂盒（上海源叶生物技术有限公司）， Ｒａｔ ＩＧＥ ＥＬＩＳＡ试剂盒（上海源叶生物技术有限公司），４０２ＡＩ型超声雾化 器（上海鱼跃医疗设备有限公司），酶标阅读仪（雷杜），计算机图像分析 系统（ｉｐｐ６．０）。 １．３动物分组、造模及给药 ＜０＿０１）；治疗组与模型组比较，ＩｇＥ、ＣＰ含量均降低（Ｐ（Ｏ．Ｏ１）。 表１大鼠肺组织ＩｇＥ、ＣＰ表达溶度（ｉ±ｓ，ｎ＝７，Ｐｇ．ｍＬ一１） ６—８周龄雄性ｓＤ大鼠４ｏ只，ＳＰＦ级，体质量１８０—２２０ｇ，购于安徽 医科大学实验动物中心，许可证号：ｓｃＹＫＢ（皖）２０１１—００２。随机分为正常 组、模型组、麻杏石甘汤组、地塞米松组，每组１Ｏ只。 制备热哮模型，除正常组外，各组均在第１、８天腹腔注射１０％卵 ｌｍｌ致敏，同时鼻滴４０ｕｌＬＰＳ稀释液人大鼠双侧鼻孔（终浓度４００ｕｇ． ｍｌ一１），从第１５天开始以１％卵蛋白溶液超声雾化诱喘，每次３０ｒａｉｎ，每 Ｅｔ一次，连续７天，以大鼠出现发热、烦躁、汗多、口渴、点头、节律性收腹 样喘促等现象，提示模型复制成功。正常组参照上述方法，只是致敏与激 发时均以生理盐水代替卵蛋白溶液，不用ＬＰＳ滴鼻。造模成功后，继续雾 化激发４周。造模后第２１天开始给药。正常组、模型组灌胃等容积的 ９．０／Ｌ氯化钠溶液，地塞米松组灌ｆｌｔ［ｏ．４０５ ｇ．ｋｇ－１．ｄ一１】，麻杏石甘汤组灌 服【３．７８ ｇ・ｋｇ－１・ｄ－１］。末次激发２ｈ内，取左肺固定，右肺直接一８Ｏ℃冻存 备用。 １．４病理检测 备注：与正常组比较，＃Ｐ＜０．０５，－ｋＰ＜Ｏ．Ｏ１；与模型组比较，口Ｐ＜０． ０５。ＡＰ＜０．Ｏ１。 ３讨论 支气管哮喘是由多种炎性细胞及其介质参与的慢性呼吸疾病，我 们一直认为导致哮喘的主要致病细胞是嗜酸性粒细胞（ＥＯＳ），此类嗜酸 性粒细胞哮喘（ＥＡ）可以被糖皮质激素所抑制。但是近年来出现了以局 部中性粒细胞（ＰＭＮ）侵润为主的炎症，即非嗜酸性粒细胞哮喘（ＮＥＡ）ｔ￣。 此类患者，临床多有感染，出现发热，苔黄，脉数等热证，多为热哮。结合 本实验，我们从以下三方面讨论评价热哮模型：中性粒细胞（ＰＩＮ）评价： 冷哮患者大多可以确定明确的过敏源，嗜酸性粒细胞明显增高，多属外 源性哮喘。热哮患者大多有呼吸道感染，多属内源性、混合性哮喘或喘支 炎，其白细胞和中性粒细胞明显增高。因此局部以中性粒细胞为主兼有 嗜酸粒细胞和淋巴细胞浸润的气道炎症是热哮模型成功的标志之一，本 实验病理检测中热哮模型组中性粒细胞浸润明显，符合此评价标准。刘 宗伟等人发现热哮患者的血清总Ｉ 较正常人高Ｉ．１，我们的实验结果与 其一致。热哮一般伴有感染，因此热哮的免疫反应比其他类型的哮喘高， 左上肺用中性福尔马林固定，石蜡包埋，切片，ＨＥ染色，光镜下观 察肺组织的病理变化。 １．５ ＩｇＥ、ＣＰ的测定（ＥＬＩＳＡ）：设标准空；加样；温育；配液；洗涤；／Ｊｎ酶；温 育；洗涤；显色；终止测定各孔的吸光度（０Ｄ值）；结果判定：绘制出标准 品线性回归曲线；按直线回归方程式计算出样品浓度，再乘以稀释倍数 ５。即为样品的实际浓度。 １．６统计学方法：采用ＳＰＳＳ１７．０统计软件分析。计量资料用均数±标准 ２０１４年２月第１３卷第２期 Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２０１４ Ｖｏ１．１３ Ｎｏ．２ 今日健康 ＪＩＮ ＢＪｎＡＮ ＫＡＮＧ ・２９ｌ・ 而是或这或那的原因选择了这个职业。然而导致相当大部分男护对工作 产生了极大的排斥和逆反心理，这也是护生实习过程中存在的一个特殊 的极大极明显的心理反应。所以，针对护理工作中这一小部分特殊群体， 育和医德医风整改。 总之，护生在临床实习工作中的一系列心理反应，就其原因在于当 前青年思想政治教育和心理教育问题越现突出。护生是护理事业发展的 新生力量和后备军，心理状态不好会影响其实践学习，动摇从事护理工 我们应当采用各种有效的方法进行说服教育。加强对男护的心理教育和 心理保护，从精神和物质等多方面给予大力支持和鼓励。在师资方面做 作的决心。因此，“学校、医院、家庭都应帮助护生正确面对挑战，提供各 种有效途径、方法调整心理，使护生积极面对生活中的各种事件，完成从 护生到护士角色的转换，在今后工作中发挥更好的作用［３］。”在当今社会 转型和青年护生角色转变的关键时期，做好青年护生的思想政治教育和 好准备，在男护的实习过程中，ｌｆ缶床老师应给予高度重视。强化男护的心 理素质，分析其优势，增强信心，疏导正确的就业观念，特别注意协调男 护与患者的关系。 ４对未来护生临床实习工作的展望 心理教育工作无异是一项伟大的工程。 临床实习工作是护生向护士转变的一条必经之路，是个体角色转 换的桥梁和过渡，是从学校走上社会工作岗位关键性的一步。在此过程 参考文献 中，护生要完成生理需求、心理满足、物质需要和角色功能多方面的转 ｆ１中国共产党第十八次全国人民代表大会报告 １１变，而这些转变是护生在实习过程中矛盾的出现和解决中不断形成和得 【２】用涓．护生在临床实习中心理问题调查及临床带教对策Ｕ１中华现代护理学杂志 以满足的。护生大多在１８—２２岁之间，“可塑性强、叛逆心理大，在分析 ２０１２，９（１２）． 问题和解决问题方面明显存在不足，带教老师应针对不同时期、不同个 ［３】陆晓蓉，吴叶萍．护生临床实习期间的心理压力调查及研究Ⅱ】中华现代临床医 体，采取相应的心理疏导和带教方法目，”同时要加强护生的思想政治教 学杂志。２０１２，１０（３）． 幸・・争・孛・夺・÷・夺・夺・夺・・｛ ・ 牵・夺・夺・夺・夺・夺・夺・夺・夺－夺・夺・夺・夺・夺・夺・夺・幸・夺・・争・夺・÷・夺・夺・串・夺・夺・・串・｛ ・夺・孛・夺・牵・夺・ （上接第２８０页） 识不够，一些行人不严格按照交通规定，闯红灯、非法挤占机动车道等。 主要是因为最近几年来医院住院和手术的病人逐渐增多有关。从２０１ １ ３．２跌伤 年一２０１３年，医院的出院人数超过了５万人次，因此医院应该加强相关 在本次的调查中，跌伤在引起外伤和中毒现象因素中占第二位。根 科室的管理工作，并不断落实各项医疗措施，从而尽可能降低手术和医 据相关资料显示，跌伤中从高处跌落物体致伤所占比例较高，这主要是 疗并发症的产生。 因为最近几年，城市建筑项目的逐渐增多，但是建筑工人缺乏高度的安 全意识，再加上施工技术不熟练、施工单位缺乏应有的安全保护措施等。 参考文献 另外，由于老人生理机能逐渐退化，反应迟钝，而小孩子缺乏自我保护的 【１】徐洁．近１０年损伤与申毒病例统计分析Ⅱ１．中国医院统计，２００６，１３（２）：１３３－１８４ 能力，因此造成的意外摔倒事故较为普遍。 【２】田丽华，潘东峰．某医院损伤与中毒病人特征分析卟中国病案，２０１１，１２（５） ３．３手术和医疗并发症 ５４－５５． 在这次的调查中，笔者发现手术和医疗并发症引发的损伤中毒排 在所有因素中的第三位。这跟之前相关文献报道相比，顺位有了前移，这 通讯作者：刘世全，男，（１９６３．９－）四川蓬溪人高级统计师，研究方向：医学信息。 夺・夺・夺・ ・夺・夺・夺・夺・争・÷・夺 ・争・夺・幸・夺・争・夺・・争・争・专・夺・夺・夺・夺・夺・夺・ （上接第２９３页） 据此调查结果对提高教学医院护理人员科研能力实施具有针对性的措 分发挥护士主斓能动性，增加医院的科研氛周，提升医院的影响力；同时也可为Ｉ缶 施，尤其是工作￡ｆ劂．氐、学历低、职称低的护理人员更直响 卿引导，在护士 床挣匿Ｉ二ｆ 据，缓解护詹拱系，促进护理事业的发展。 规范化培训及继续教育中，可将护理科研知识纳入培训的范围。 通过调查，发现我院护理人员整体科研能力尚处于较低水平，作为 参考文献 医学院校的附属医院，培养护理人员良好的科研素质可提高临床带教水 【１】张亚军，杨广源，刘春甫等．充分利用循证医学为教学医院医教研服务Ⅱ】内蒙古中 平，护理管理者可尝试各种能为 ｝护士积极争取参与科研的机会，如加 医药。２０１１，１（０１）１１２—１１３ 强团队建设，成立科研小组，利用科研骨干带动科室护理科研活动等 ， 【２】武燕燕，张志云．某医院临床护士护理科研能力现状及影响因素调查分析Ⅱ】中国 专人协助和指导护士开展科研；实施奖励制度，鼓励护士开鼯 ，充 护理管理。２０１３。１３￣）３０—３１ 夺・争・・｛ ・夺・÷・夺・夺・夺・・｛，・・争・夺・—争・÷・夺・夺・・争・夺・｛ ・夺・夺 ・夺・夺・夺・夺・夺・牵・・争・孛・夺・夺・夺・÷・夺・・孛 ・ ・夺・・夺・夺・ ・夺・夺・・串・ （上接第２１２页） 更容易刺激免疫细胞的大量生成，热哮的ＩｇＥ水平较健康人显著升高亦 是热哮模型成功的标志之一。肥大细胞（Ｍｃ）是人速发型过敏反应的主要 参考文献 效应细胞。酶免疫分析法测定ｃｐ、类胰蛋白酶、胃蛋白酶，是ＭＣ脱颗粒 【１１苏成程，】章匀，唐艳芬，黄海风．哮喘病各证型发病特点与微观指标分析卟山西中 更具有特异性的标志，以上指标在系统性过敏反应病人血清中含量升 医２０１２．２８０）：１４—１５． 高，这些变化可作为Ｍｃ参与疾病发展的准确的临床指征。有学者研究 ［２】刘静．Ｔｈ１７细胞参与调控哮喘小鼠中性粒细胞性气道炎症的分子机制研究ｐ】． 发现肥大细胞羧肽酶更是过敏症的血液新标志物［５】，模型组的ＣＰ水平 ２０１１。广西：广西医科大学．２７—２９． 明显高于其他三组，有统计学差异，表明模型组大鼠存在过敏反应，标志 ［３】夏雏，任振义．中性粒细胞性哮喘研究进展Ⅱ】医学研究杂志．２０１２，４１（１）： 热哮模型造模成功。 １７３－１７５． 通过以上指标的检测，可证明模型组为成功的热哮模型。但是推广 【４】刘宗伟．气管哮喘中医辨证分型与血清ＩＬ一２５、总ＩｒＥ关系的临床研究ｐ】，２００９，， 这个中医热哮动物模型，还需要进一步应用相应的药物进行反证，因此 南京：南京中医药大学．２２－２３． 【５】潘琼，丁梅芳，张舒，宁颖，刘宏伟，魏红，岳虹霓．变态反应性疾病儿童血浆肥大细 该模型还有待更加深入的探讨评价。 胞羧肽酶和类糜蛋白酶含量的检测Ⅱ】中国当代儿科杂志．２０１１，１３（１０）：８１４—８１６．