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RNA结合蛋白研究领域的RIP-seq实验,是一种通过抗体捕获细胞内RNA与蛋白复合物的高通量测序技术。它在理解转录后*网络动态中扮演着关键角色,主要应用于研究RNA与蛋白的相互作用,包括非编码RNA如LncRNA、miRNA等。以下是RIP-seq实验的基本分析流程和两个案例分享。
实验流程包括前期准备,如提供基因组信息、选择合适的抗体(推荐使用ChIP或IP级别的抗体)和合适的样本(如组织、细胞等),并设置对照。具体步骤包括紫外交联、裂解产物准备、免疫沉淀、文库构建(如mRNA、LncRNA或miRNA的特异性文库)以及测序和生信分析。分析结果涉及基因组比对、功能元件分布分析、PCA分析等,以及与RNA-seq、RNA pull down、m6A-seq等多组*合分析。
案例一,华中农业大学的研究揭示了EZH2的RIP-seq如何识别猪肌细胞生成的关键*lncRNA TCONS-00036665,该lncRNA通过与EZH2结合影响基因表达和肌细胞生成。另一案例,西北农林科技大学的研究发现m6A阅读蛋白MhYTP2通过调节 MdMLO19 mRNA的稳定性和抗氧化基因翻译效率,从而增强苹果对抗白粉病的能力。
总之,RIP-seq是一个强大的工具,可以深入解析RNA与蛋白的互作网络。想了解更多RIP-seq报告解读或需要相关技术服务,可咨询爱基百客,他们拥有丰富的实践经验可供参考。后续将详细介绍解读报告的步骤,敬请关注。